常用上海盧湘儀離心機檢驗轉基因大豆DNA成份的方法

發布時間：

2013-06-24

概要：

實驗需求常用實驗室儀器設備、盧湘儀高速冷凍離心機(12000r／min)、盧湘儀高速臺式離心機(12000r／min)、紫外分光光度計、磁力攪拌器、

實驗需求常用實驗室儀器設備、盧湘儀高速冷凍離心機(12000r／min)、盧湘儀高速臺式離心機(12000r／min)、紫外分光光度計、磁力攪拌器、高壓滅菌鍋、PCR擴增儀、電泳儀、紫外透射儀、凝膠成像系統或照相系統、重蒸餾水儀。

樣品中DNA的提取——CTAB法將100rag充分粉碎的大豆樣品，在液氮中充分研磨成粉末后加400pL冰上預冷的cTAB提取緩沖液I中。加入500txI。65~C預熱的CTAB提取緩沖液間不時輕緩顛倒混勻。待冷卻至室溫后加入儲備溶液，室溫下放置30rain。加入450gL三氯甲烷+異戊醇，輕緩顛倒混勻溶液。

將上清液轉移至干凈的離心管中，依次加600pL異丙醇及60弘L乙酸鈉溶液，輕緩顛倒混勻。12000r／min離心10min。，棄上清液后再加入100ffL 70％乙醇洗滌沉淀。12000r／min離心5min，棄上清液。除去殘留的乙醇，待沉淀干燥后，DNA沉淀溶解于100ffL TE緩沖液中，一20℃保存備用。

樣品中DNA的提取也可采用商品化基因組提取試劑盒提取。DNA溶液純度的測定和保存將DNA適當稀釋，測定并記錄其在260nm和280nm的紫外光吸收率，以一個OD260值相當于50fig／mI．DNA濃度來計算純化的DNA濃度。要求DNA溶液()D260／()D280值在1．7～2．O。依據測得的濃度將DNA溶液稀釋到25～50ng／mI．，一20℃保存。注：由于基因組DNA不宜反復凍融，因此建議對于需要經常使用的DNA需要分裝，多管存放，需要使用時取出，融化后應該立即使用，使用結束后，剩余的DNA應在4℃冰箱短期保存，存放時間不宜超過14d。

關鍵詞：